反相C18分離中，水能與許多有機溶劑混合，如水-甲醇、水-乙腈、水-四氫呋喃等，對不同的樣品分離結(jié)果也千差萬別。在流動相中加入適當(dāng)?shù)母牧紕┤缛野坊蛞宜?，可以抑制硅膠表面殘留的硅羥基的酸性，從而減少對酸或堿性組分的保留，減少拖尾；且調(diào)節(jié)流動相的PH，對酸性或堿性組分的選擇性有很大改變。對于酸性組分來說，當(dāng)流動相的PH＜7時，會增加在色譜柱上的保留時間；對于堿性樣品來說，當(dāng)流動相的PH≥7時，堿性組分為游離型（RNH2），極性小、保留時間增長、在固定相與流動相之間可以多次分配，增加堿性組分的選擇性。

 

　　C18反相色譜柱適用于質(zhì)量控制及研發(fā)過程中大多數(shù)物質(zhì)的分離。由于采用了*的表面鍵合及封端技術(shù)，有效地限制了堿性，酸性和金屬螯合物質(zhì)的二次相互作用。C18反相柱的固定相是非極性固定相，流動相極性大于固定相極性，常用溶劑一般為水和甲醇、四氫呋喃、異丙醇等與水互溶的溶劑，適應(yīng)于分離非極性或弱極性的化合物，其樣品洗脫順序為樣品極性由高到低。